Хотите обратиться непосредственно к нам?
Запросить коммерческое предложение Задать вопрос

Системы для проведения цифровой ПЦР (Digital PCR)

Цифровая ПЦР (Digital PCR) представляет собой усовершенствованный метод традиционной реал-тайм ПЦР, позволяющий прямой подсчет числа мишеней нуклеиновых кислот. В отличие от реал-тайм ПЦР, хорошо известного количественного относительного метода, цифровая ПЦР является абсолютным методом измерения. Концентрация ДНК-мишени определяется в исходном образце в виде числа копий в микролитре с чувствительностью до 1 молекулы.

Система для цифровой ПЦР QX200™ AutoDG™ Droplet Digital™ PCR System

Система капельной цифровой ПЦР от Bio-Rad - QX200 Droplet Digital PCR (ddPCR™), вышедшая на смену снятого с производства QX100, представляет собой третье поколение технологии ПЦР, которая позволяет определять абсолютное количество копий ДНК-мишени в образце. Чувствительность системы - одна копия ДНК на сто тысяч. Для проведения анализа не требуется использование стандартных кривых. Новая система для проведения цифровой ПЦР QX200 позволяет помимо использования ПЦР систем, основанных на TaqMan-зондах, работать с интеркалирующим красителем EvaGreen.

Применяется в исследованиях диагностики наследственных заболеваний, рака, вирусной нагрузки, а также для задач определения наличия ГМО в крайне низких концентрациях и других приложениях, где требуется высокая точность и простота измерений генетического материала.

Решаемые задачи:

  • Количественная оценка биомаркеров рака. Мутации, ассоциированные с онкологией, часто не удается детектировать из-за их низкой концентрации по сравнению с фоновой ДНК дикого типа в том же образце. Высокая чувствительность системы QX200 позволяет детектировать и количественно оценивать мутации в концентрациях от 0,0001% - одна на сто тысяч;
  • Обнаружение и оценка возбудителей заболеваний. Точная количественная оценка вирусной нагрузки крайне важна для определения состояния заболевания, разработки, утверждения и оценки эффективности терапии. QX200 обладает чувствительностью, достаточной для обнаружения сверхмалых количеств вирусного генетического материала, в том числе и в сложных смесях;
  • Определение количества копий гена (CNV). Вариация числа копий гена - один из основных типов полиморфизмов в геноме человека. CNV ассоциируется с раком, неврологическими и аутоиммунными заболеваниями, а также с побочными эффектами при воздействии лекарственных средств. QX200 позволяет определить CNV с точностью соотношения 1.2X, например, пять против шести;
  • Валидация и количественная оценка библиотек NGS. Используя технологии цифровой ПЦР, можно качественно и количественно оценить созданную библиотеку для наиболее эффективного использования секвенаторов;
  • Анализ экспрессии генов. Капельная цифровая ПЦР позволяет количественно определить уровень экспрессии гена: возможна оценка минимального 10% изменения экспрессии, в том числе и при низких концентрациях;
  • Тестирование продуктов на наличие ГМО. С точностью до тысячных долей процента система QX200 позволяет оценить количество генетически модифицированных ингредиентов в продуктах питания, сырье и кормах.

Рабочий процесс:

  1. Генератор капель QX200 случайным образом распределяет 20 мкл образца (целевые молекулы и фоновая ДНК) по 20 000 капель объемом 1 нл каждая;
  2. Полученная эмульсия подвергается 40 циклам ПЦР с использованием термоциклера;
  3. После прохождения ПЦР каждая капля тестируется на наличие или отсутствие в ней флуоресцентного сигнала в соответствии с присутствием в ней целевой ДНК. Сигнал в каждой капле определяется независимо;
  4. Капли с положительным и отрицательным сигналом подсчитываются для каждого образца, и программное обеспечение определяет концентрации ДНК-мишени в исходном образце в виде числа копий в микролитре.


Технические характеристики:

Генератор капель водно-масляной эмульсии QX200:
Исходный объем образца, мкл20
Емкость, количество образцов/картридж8
Количество капель на образец20 000
Размеры, мм280 х 360 х 130
Вес, кг4,5
Датчик капель QX200:
Производительность, лунки/ч32
Облучение образцасветоизлучающие диоды
Детектирование образцамульти-пиксельный счетчик фотонов
Каналы детектированияFAM (EvaGreen), HEX (VIC)
FAM (EvaGreen), HEX (VIC)есть
Размеры, мм660 х 520 х 290
Вес, кг26
Линейный динамический диапазон, порядки5
Точность±10%
Количество капель на 96-луночный планшет, млн.~1,5

Система QX200 Droplet Digital PCR

Система QX200 Droplet Digital PCR предназначена для проведения капельной цифровой ПЦР, позволяющей добиться высочайшей точности и достоверности результатов. Система состоит QX200 Droplet Generator (генератор микродисперсионных капель из кДНК или РНК-содержащих образцов) и QX200 Droplet Reader (позволяет осуществлять сверхчувствительный и точный автоматический анализ продуктов амплификации). Система позволяет осуществлять абсолютный количественный анализ молекул ДНК или РНК меченных EvaGreen или проб.


Преимущества:

  • гибкость системы и оптимизация ее для EvaGreen и TaqMan зондов, любых производителей;
  • сверхчувствительность и сверхточность количественного анализа продуктов амплификации гена-мишени в каждой капле образца;
  • фракционирование образцов на нанокапли сводит к минимуму влияние на результат исследований таких параметров как наличие ингибиторов ПЦР и эффективности протекания амплификации за счет абсолютного подсчета гена-мишени в каждой капле;
  • исключительная точность (± 10%) определения разницы уровня генной экспрессии в каждой капле образца;
  • отсутствие необходимости использования калибровочных кривых;
  • прямое обнаружение редкого варианта гена-мишени в сложном окружении.
  • значительно более высокая чувствительность по сравнению с другими методами.

Применение:

Система QX200 для проведения капельной цифровой ПЦР позволяет получить точные количественные результаты, и может быть использована в следующих областях:


  • Высокоточное определение количества копий гена-мишени (CNV): капельный цифровой ПЦР позволяет определить CNV с точностью соотношения 1.2х.
  • Определение редких мутации в лабораторной диагностике (чувствительность прибора позволяет детектировать 1 мутацию из 1 000 000 копий тотальной ДНК)
  • Выявление наличия опухолевых клеток при очень небольшом титре.
  • Изучение клональной гетерогенности в популяциях клеток по уровню экспрессии генов-мишеней.
  • Исследование вариабельности генной экспрессии на уровне единичных клеток.
  • Позволяет осуществлять miRNA анализ с более высокой точностью и чувствительностью по сравнению с RT-PCR.
  • Высокоточное изучение эпигенома, в частности характер метилирования гена-мишени и модификацию хроматина на уровне единичных клеток.
  • Детекция патогенов;
  • Использование в области Next generation sequencing.
  • Детекция ГМО в продуктах питания.

Принцип работы системы:

Этап разделения каждого из исследуемых образцов на микродисперсные капли, объемом 1 нл, посредством QX200 Droplet Generator.

По 20 мкл каждого из 8 приготовленных для ПЦР-реакции образцов, содержащий либо кДНК либо РНК переносят в пластиковый картридж QX200 Droplet Generator.


В соответствующие каналы картриджа заливается специальное минеральное масло.


Наполненный картридж устанавливают QX200 Droplet Generator, где образцы и масло соединяются между собой по микро каналам внутри картриджа для получения эмульсии. В эмульсии каждый из 8 образцов разбивается примерно на 20 000 монодисперсныхкапель, объем каждой капли 1 nL.


Этап амплификации.

Эмульсионные образцы переносят в стандартный 96-луночный планшет для амплификации с помощью стандартного амплификатора, например C1000 touch.






Этап автоматизированного анализа с помощью QX200 Droplet Reader.

По завершении амплификации планшет с образцами загружается в QX200 Droplet Reader, который обеспечивает автоматический анализ яркости флуоресцентного сигнала в каждой капле. Затем рассчитывается концентрация продуктов амплификациигена-мишени по пороговой амплитуде свечения флуорецентных меток.




Технические характеристики:

Генератор капель водно-масляной эмульсии QX200:
Исходный объем образца, мкл20
Емкость, количество образцов/картридж8
Количество капель на образец20 000
Размеры, мм280 х 360 х 130
Вес, кг4,5
Датчик капель QX200:
Производительность, лунки/ч32
Облучение образцасветоизлучающие диоды
Детектирование образцамульти-пиксельный счетчик фотонов
Каналы детектированияFAM (EvaGreen), HEX (VIC)
FAM (EvaGreen), HEX (VIC)есть
Размеры, мм660 х 520 х 290
Вес, кг26
Линейный динамический диапазон, порядки5
Точность±10%
Количество капель на 96-луночный планшет, млн.~1,5

Система QX100 Droplet Digital PCR

Система QX100 Droplet Digital PCR предназначена для проведения капельной цифровой ПЦР, позволяющей добиться высочайшей точности и достоверности результатов. Система состоит QX100 Droplet Generator (генератор микродисперсионных капель из кДНК или РНК-содержащих образцов) и QX100 Droplet Reader (позволяет осуществлять сверхчувствительный и точный автоматический анализ продуктов амплификации).


Преимущества QX100™:

  • сверхчувствительность и сверхточность количественного анализа продуктов амплификации гена-мишени в каждой капле образца;
  • исключительная точность (± 10%) определения разницы уровня генной экспрессии в каждой капле образца;
  • отсутствие необходимости использования калибровочных кривых;
  • прямое обнаружение редкого варианта гена-мишени в сложном окружении.
  • Значительно более высокая чувствительность по сравнению с другими методами.

Применение QX100™:

Система QX100 для проведения капельной цифровой ПЦР позволяет получить точные количественные результаты, и может быть использована в следующих областях:

  • Высокоточное определение количества копий гена-мишени (CNV): капельный цифровой ПЦР позволяет определить CNV с точностью соотношения 1.2х.
  • Определение редких мутации в лабораторной диагностике (чувствительность прибора позволяет детектировать 1 мутацию из 1 000 000 копий тотальной ДНК)
  • Выявление наличия опухолевых клеток при очень небольшом титре.
  • Изучение клональной гетерогенности в популяциях клеток по уровню экспрессии генов-мишеней.
  • Исследование вариабельности генной экспрессии на уровне единичных клеток.
  • Позволяет осуществлять miRNA анализ с более высокой точностью и чувствительностью по сравнению с RT-PCR.
  • Высокоточное изучение эпигенома, в частности характер метилирования гена-мишени и модификацию хроматина на уровне единичных клеток.
  • Точное определение количество копий РНК/ДНК вируса.
  • Детекция ГМО в продуктах питания.

Принцип работы системы QX100:

Этап разделения каждого из исследуемых образцов на микродисперсные капли, объемом 1 нл, посредством QX100 Droplet Generator.

По 20 мкл каждого из 8 приготовленных для ПЦР-реакции образцов, содержащий либо кДНК либо РНК переносят в пластиковый картридж QX100 Droplet Generator.

В соответствующие каналы картриджа заливается специальное минеральное масло.

Наполненный картридж устанавливают QX100 Droplet Generator, где образцы и масло соединяются между собой по микро каналам внутри картриджа для получения эмульсии. В эмульсии каждый из 8 образцов разбивается примерно на 20 000 монодисперсных капель, объем каждой капли 1 nL.

Этап амплификации.

Эмульсионные образцы переносят в стандартный 96-луночный планшет для амплификации с помощью стандартного амплификатора, напримерC1000 touch.




Этап автоматизированного анализа с помощью QX100 Droplet Reader.

По завершении амплификации планшет с образцами загружается в QX100 Droplet Reader, который обеспечивает автоматический анализ яркости флуоресцентного сигнала в каждой капле. Затем рассчитывается концентрация продуктов амплификации гена-мишени по пороговой амплитуде свечения флуорецентных меток. Таким образом, система помогает определить не только наличие копийгена-мишени в каждой капле, но и его уровень экспрессии.



Технические характеристики:

НаименованиеХарактеристика
Объем ПЦР-пробы20 мкл
Количество анализируемых образцов8 образцов
Количество капель, генерируемых на 1 пробу20,000 капель
Мультиплексный анализдо 5 мишеней
Возможности QX100 droplet reader 96-луночный ПЦР-планшет
Пропускная способность QX100 droplet reader throughput 32 лунки/ час
Каналы детекцииFAM, HEX (VIC)
Точность±10%
Количество капель на 96-луночном планшете1.4 миллиона

Супермиксы для цифровой ПРЦ

Смесь для подготовки образцов QX100/QX200
Упаковка: 5 мл











Смесь для подготовки образцов QX100/QX200
Упаковка: 5 мл










Супермикс с модифицированной полимеразой SsoFast и красителем EvaGreen.

Идеален для HRM;

быстрая и стабильная работа.

EvaGreen – новый флуоресцентный краситель для ПЦР;

превосходит SYBR Green по всем параметрам;

не ингибирует реакцию.

Digital PCR Library Quantification Kits

Хотите обратиться непосредственно к нам?
Запросить коммерческое предложение Задать вопрос